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ND2000超微量分光光度計主要由以下部分組成

更新時間:2025-04-10瀏覽:1030次

  ND2000超微量分光光度計是一種專為微量樣本設(shè)計的分光光度計,可檢測低至1-2μL的核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的濃度和純度。其核心原理基于朗伯-比爾定律(A=εcl),通過測量特定波長(如DNA 260 nm、蛋白質(zhì)280 nm)的光吸收值,計算樣本濃度。其主要由光源、單色器、樣品室、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。光源通常采用氘燈,它能發(fā)出連續(xù)的紫外光譜。單色器(如光柵或棱鏡)用于從光源發(fā)出的廣譜光線中選擇出單一波長的光。樣品室內(nèi)放置了微量樣品池,其路徑長度通常在幾毫米到幾厘米之間,以適應(yīng)微量樣品的測量需求。檢測器則負責捕捉經(jīng)過樣品吸收后的光線強度,最后由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行分析和計算。
  ND2000超微量分光光度計主要由以下部分組成:
  一、光源
  作用
  光源是超微量分光光度計的起始部件,它的作用是提供穩(wěn)定、足夠的光線。這些光線通常是寬頻帶的,涵蓋了從紫外到可見光甚至近紅外的波長范圍。例如,在檢測蛋白質(zhì)、核酸等生物樣品時,不同波長的光被樣品吸收的程度不同,通過分析這種吸收情況來獲取樣品的信息。
  類型
  氘燈:主要用于紫外光區(qū)(約190-400nm)。氘燈能夠發(fā)出強烈的紫外光,其發(fā)光原理是基于氘氣在高壓電場中受到激發(fā)而發(fā)光。它具有高能量、高穩(wěn)定性的特點,適用于對核酸、蛋白質(zhì)等具有紫外吸收特性的物質(zhì)進行檢測。
  鹵鎢燈:用于可見光和近紅外光區(qū)(約360-1100nm)。鹵鎢燈是通過在燈泡內(nèi)填充鹵族元素(如碘、溴等)和鎢絲來實現(xiàn)照明的。它在可見光范圍內(nèi)能提供連續(xù)、穩(wěn)定的光譜,常用于對有色化合物、生物樣品中的色素等物質(zhì)進行檢測。
  二、單色器
  作用
  單色器的作用是將光源發(fā)出的復合光分解為單一波長的光。因為在分光光度計測量過程中,需要精確地選擇特定波長的光來照射樣品,以獲得準確的吸光度值。如果沒有單色器進行分光,就無法準確測定樣品對不同波長光的吸收情況。
  組成結(jié)構(gòu)與原理
  棱鏡單色器:一般由玻璃或石英制成的棱鏡構(gòu)成。當復合光進入棱鏡后,由于不同波長的光在棱鏡中的折射率不同,光會被分解成不同角度的光譜。通過調(diào)整棱鏡的角度,可以選擇特定波長的光輸出。例如,在簡單的分光裝置中,白色光經(jīng)過棱鏡后形成紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫等不同顏色的光帶,通過移動狹縫位置就可以獲取其中單一波長的光。
  光柵單色器:它利用光柵的衍射原理進行分光。光柵上有許多密集的刻痕或條紋,當復合光照射到光柵上時,會發(fā)生衍射現(xiàn)象,不同波長的光在空間上的衍射角度不同。通過轉(zhuǎn)動光柵,可以改變衍射光的角度,從而選擇出特定波長的光。光柵單色器具有較高的分辨率和較寬的波長范圍,在超微量分光光度計中應(yīng)用廣泛。
  三、樣品室
  作用
  樣品室是用來放置待測樣品的地方,它為樣品提供了一個相對穩(wěn)定的測量環(huán)境。在測量過程中,樣品室內(nèi)的樣品會受到光源發(fā)出的單色光的照射,未被樣品吸收的光會透過樣品到達檢測器。
  特點與要求
  樣品室通常具有精確的溫度控制功能,因為溫度會對樣品的吸光度產(chǎn)生影響。對于一些對溫度敏感的樣品,如酶促反應(yīng)體系中的酶活性檢測,保持恒定的溫度至關(guān)重要。此外,樣品室的設(shè)計要保證光線能夠順利通過,且不會發(fā)生散射或反射等影響測量準確性的情況。有些樣品室還配備了攪拌裝置,用于在測量過程中使樣品均勻混合,避免因樣品濃度不均勻而導致測量誤差。
  四、檢測器
  作用
  檢測器的主要功能是將透過樣品后的光信號轉(zhuǎn)換為電信號。它是超微量分光光度計的核心部件之一,直接決定了儀器的靈敏度和測量精度。檢測器對不同波長的光具有響應(yīng)能力,并且能夠?qū)⒐獾膹姸茸兓瘻蚀_地轉(zhuǎn)化為可測量的電信號。
  類型
  光電倍增管(PMT):它是一種常用的檢測器,具有高的靈敏度。光電倍增管內(nèi)部有一個光電陰極和一個陽極,以及一系列的倍增電極。當光子照射到光電陰極上時,會產(chǎn)生光電子,這些光電子在電場作用下被加速并依次撞擊倍增電極,每碰撞一次就會釋放出更多的電子,從而使電流得到放大。它主要應(yīng)用于紫外和可見光區(qū)域,尤其適用于檢測微弱光信號。
  二極管陣列檢測器:這種檢測器由多個二極管組成陣列。它可以同時檢測多個波長的光,能夠快速獲取樣品在不同波長下的吸光度信息。二極管陣列檢測器具有良好的線性范圍和較快的響應(yīng)速度,在全波長掃描等復雜測量模式下具有優(yōu)勢。
  五、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
  作用
  數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)是超微量分光光度計的控制中心和數(shù)據(jù)分析中樞。它負責控制儀器的各個部件(如光源、單色器、檢測器等)協(xié)同工作,并且對檢測器傳來的電信號進行處理和分析,最終將測量結(jié)果顯示給用戶。
  功能與組成
  數(shù)據(jù)采集與轉(zhuǎn)換:將從檢測器輸出的模擬電信號轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號,以便后續(xù)處理。這通常通過模數(shù)轉(zhuǎn)換器(ADC)實現(xiàn),ADC的性能直接影響數(shù)據(jù)的采集精度。
  軟件操作系統(tǒng):數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中的軟件提供了操作界面,用戶可以通過軟件控制儀器的參數(shù)設(shè)置(如波長選擇、測量模式、樣品室溫度設(shè)定等),同時軟件還具備數(shù)據(jù)分析功能,如計算吸光度、濃度、繪制光譜曲線等。一些先進的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)還能夠與其他設(shè)備(如計算機網(wǎng)絡(luò)、實驗室信息管理系統(tǒng)等)進行數(shù)據(jù)交互和共享。

 

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